技術(shù)文章
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基因重組相關(guān)的基因型
2010-03-29基因重組相關(guān)的基因型recA（Recombination）功能：recA基因表達(dá)ATP依賴型DNA重組酶，它在λ噬菌體與基因組DNA的溶原重組時(shí)起作用，同時(shí)具有對(duì)DNA放射性損傷的修復(fù)功能。由recA基因的變異所產(chǎn)生的基因型使同源或異源DNA的重組不能進(jìn)行，保持插入DNA的穩(wěn)定性，對(duì)DNA的轉(zhuǎn)化有利。一個(gè)菌株的基因型如果是recA，則說(shuō)明此菌株的表現(xiàn)型是重組...
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Northern blot技術(shù)
2010-03-24Northernblot技術(shù)經(jīng)乙二醛和二甲基亞砜變性處理后進(jìn)行的RNA電泳這一方法原于McMaster和Carmichael（1977）。含有乙二醛－DMSO的凝膠比含有甲醛的凝膠更難于進(jìn)行電泳，因?yàn)榍罢哂緞?dòng)速率較慢而且需將電泳液時(shí)行循環(huán)以避免電泳過(guò)程中形成過(guò)高的H＋梯度。盡管上述兩種凝膠具有近乎相等的分辨率（Miller，1987），但用含朋乙二醛－DMS...
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植物組織RNA提取
2010-03-24植物組織RNA提取的難點(diǎn)及對(duì)策從植物組織中提取RNA是進(jìn)行植物分子生物學(xué)方面研究的必要前提。要進(jìn)行Northern雜交分析，純化mRNA以用于體外翻譯或建立cDNA文庫(kù)，RT-PCR及差示分析等分子生物學(xué)研究，都需要高質(zhì)量的RNA。因此，從植物組織中提取純度高、完整性好的RNA是順利進(jìn)行上述研究的關(guān)鍵所在。a）*Y（WL從文獻(xiàn)報(bào)道上看，有許多植物就是由于未能...
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復(fù)蘇方法
2010-03-15復(fù)蘇方法1．從液氮罐中取出安剖；有時(shí)因安剖未封嚴(yán)，浸入了液氮，取出后因安剖內(nèi)液氮迅速氣化而發(fā)生爆炸，因此應(yīng)帶有防護(hù)眼睛和手套。2．迅速放入盛有36℃～37℃水的搪瓷罐中，扣上蓋并不時(shí)搖動(dòng)，盡快解凍。3．剪開紗布口袋，取出安剖，用70％酒精擦拭消毒后，凈化臺(tái)上打開蓋，用吸管吸出細(xì)胞懸液，裝入離心管中，再補(bǔ)加10ml培養(yǎng)液，吹打使細(xì)胞懸浮。4．低速離心（500～...
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蛋白質(zhì)提取的方法
2010-03-15蛋白質(zhì)提取的方法總匯1、植物組織蛋白質(zhì)提取方法1、根據(jù)樣品重量（1g樣品加入3.5ml提取液，可根據(jù)材料不同適當(dāng)加入），準(zhǔn)備提取液放在冰上。2、把樣品放在研缽中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上靜置（3-4小時(shí)）。3、用離心機(jī)離心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清夜，樣品制備完成。蛋白質(zhì)提取液：300ml1、1Mtri...
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幾種常用轉(zhuǎn)化細(xì)胞的轉(zhuǎn)化
2010-03-15幾種常用轉(zhuǎn)化細(xì)胞和轉(zhuǎn)化技術(shù)1）致癌化學(xué)物轉(zhuǎn)化細(xì)胞：轉(zhuǎn)化敘利亞地鼠胚胎細(xì)胞實(shí)驗(yàn)1．取材：妊娠后第13天取材，取數(shù)個(gè)同窩胚胎，去頭和內(nèi)臟，在無(wú)菌條件下剪碎至米粒大小，再用0.25％胰蛋白酶（含0.01％EDTA）37℃消化30分鐘，濾過(guò)、低速離心、吸除消化液、加入營(yíng)養(yǎng)液、制備成細(xì)胞懸液、接種入75cm/培養(yǎng)瓶中，接種密度10～20×106/75cm，37℃培養(yǎng)2...
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如何提高RT-PCR反應(yīng)體系的靈敏度
2010-03-10如何提高RT-PCR反應(yīng)體系的靈敏度：1、分離高質(zhì)量RNA成功的cDNA合成來(lái)自高質(zhì)量的RNA。高質(zhì)量的RNA應(yīng)保證全長(zhǎng)并且不含逆轉(zhuǎn)錄酶的抑制劑如EDTA或SDS等，以及盡可能減少基因組DNA污染。RNA的質(zhì)量決定了你能夠轉(zhuǎn)錄到cDNA上的序列信息量的大值。2、使用無(wú)RNaseH活性的逆轉(zhuǎn)錄酶在逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中經(jīng)常加入RNase抑制劑以增加cDNA合成的長(zhǎng)度和產(chǎn)...
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影響質(zhì)粒提取的因素
2010-03-08影響質(zhì)粒提取的因素：質(zhì)粒提取的得率和質(zhì)量與很多因素有關(guān)，如宿主菌的種類和培養(yǎng)條件、細(xì)胞的裂解、質(zhì)?？截悢?shù)、質(zhì)粒的穩(wěn)定性、抗生素、吸附柱的吸附量等。宿主菌種類質(zhì)粒主要存在于細(xì)菌、放線菌和真菌細(xì)胞中，多數(shù)情況下我們是從大腸桿菌中提取質(zhì)粒。大腸桿菌的菌株不同會(huì)影響質(zhì)粒提取的質(zhì)量。從宿主菌如DH5α和*0中可以得到高質(zhì)量的質(zhì)粒DNA。HBl01和它的衍生菌株，如TG...
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質(zhì)粒提取原理及流程
2010-03-08質(zhì)粒提取原理及流程：較常用的質(zhì)粒DNA提取方法有3種：堿裂解法、煮沸法和去污劑（如Triton和SDS）裂解法。前兩種方法比較劇烈，適用于較小的質(zhì)粒（15kb）。堿裂解法是一種應(yīng)用為廣泛的制備質(zhì)粒DNA的方法，其原理為：染色體DNA比質(zhì)粒DNA分子大得多，且染色體DNA為線狀分子，而質(zhì)粒DNA為共價(jià)閉合環(huán)狀分子；當(dāng)用堿處理DNA溶液時(shí)，線狀染色體DNA容易發(fā)...
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質(zhì)粒DNA分離和純化
2010-03-08質(zhì)粒DNA分離和純化：純化要求質(zhì)粒DNA中不應(yīng)存在對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)中的酶活性有抑制作用的有機(jī)溶劑分子或過(guò)高濃度的金屬離子。避免其它生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖、脂類、基因組和RNA的污染。不同的后續(xù)實(shí)驗(yàn)對(duì)于質(zhì)粒純度的要求不同，常規(guī)的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)（如酶切、測(cè)序等）普通純度的質(zhì)粒即可滿足實(shí)驗(yàn)，而對(duì)于轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，要求質(zhì)粒的純度較高（如高純度或無(wú)內(nèi)毒素）。可以選擇不同的質(zhì)粒提...
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Lowry法蛋白濃度測(cè)定
2010-02-27Lowry法蛋白濃度測(cè)定目錄號(hào)規(guī)格價(jià)格PC0030-10001000T280.00產(chǎn)品簡(jiǎn)介：Lowry法包括兩步反應(yīng)：*步是在堿性條件下，蛋白質(zhì)與銅作用生成蛋白質(zhì)-銅絡(luò)合物；第二步是此絡(luò)合物將Folin試劑還原，產(chǎn)生深藍(lán)色，顏色深淺與蛋白質(zhì)含量成正比。定量范圍為5～100μg/ml蛋白質(zhì)。Folin試劑顯色反應(yīng)由酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸引起，因此樣品中若含有...
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BCA蛋白濃度測(cè)定
2010-02-27BCA蛋白濃度測(cè)定目錄號(hào)規(guī)格價(jià)格PC0020-500500T280.00產(chǎn)品簡(jiǎn)介：Bicinchoninicacid（BCA）法是在世界上常用的蛋白濃度檢驗(yàn)方法之一BCA法基礎(chǔ)上改進(jìn)而成。其原理與Lowery法蛋白定量相似，即在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)與Cu2+絡(luò)合并將Cu2+還原成Cu+。兩分子BCA與一個(gè)Cu+螯合形成穩(wěn)定的紫藍(lán)色復(fù)合物，在562nm處有高的光吸...
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Bradford蛋白濃度測(cè)定
2010-02-27Bradford蛋白濃度測(cè)定目錄號(hào)規(guī)格價(jià)格PC0010-25002500T150.00產(chǎn)品簡(jiǎn)介：Bradford法是常用的蛋白質(zhì)快速定量方法。CoomassiebrilliantblueG-250與蛋白質(zhì)結(jié)合使染料的大吸收峰由465nm變?yōu)?95nm，溶液的顏色由棕色變?yōu)樘m色，595nm波長(zhǎng)下吸光度值與蛋白含量成正比。靈敏度比Lowry法高4倍，與BCA法相...
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蛋白電泳（PAGE）
2010-02-27蛋白電泳（PAGE）聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺和交聯(lián)劑N,N-甲叉雙丙烯酰胺在加速劑N，N，N，N—四甲基乙二胺（簡(jiǎn)稱TEMED）和催化劑過(guò)硫酸銨（簡(jiǎn)稱AP）或核黃素（即vitaminB2）的作用下聚合交聯(lián)成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠，以此凝膠為支持物的電泳稱為聚丙烯酰胺凝膠電泳（polyacrylamidegelelectrophoresis，簡(jiǎn)稱PAGE）S...
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胍鹽/β-巰基乙醇法
2010-02-02胍鹽/β-巰基乙醇法適用于各種不同動(dòng)物材料和次生代謝物少的植物材料。在這種方法中，胍鹽使細(xì)胞充分裂解，β-巰基乙醇作為蛋白的變性劑在實(shí)驗(yàn)全程中可以抑制RNase的活性，保護(hù)RNA不被降解。